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| 产地 | 武汉 |
| 品牌 | 普健生物 |
| 货号 | 毕赤酵母表达系统 |
| 保存条件 | |
| 用途 | 毕赤酵母表达系统 |
| 包装规格 | 毕赤酵母表达系统 |
| 保质期 | 1 year |
| 是否进口 | 否 |
服务简介：
毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是近年来发展迅速、应用广泛的一种真核表达系统。它是甲醇营养型酵母菌，有两个乙醇氧化酶(Alcohol oxidase，AOX)编码基因AOX1和AOX2，两者序列相似，AOX1基因严格受甲醇诱导和调控。当甲醇为 碳源时，AOX1启动子可被甲醇诱导，启动乙醇氧化酶的表达，从而用甲醇进行代谢，含AOX1启动子的质粒可用来促进编码外源蛋白的目的基因的表达。
主要优势：
1.含有特有的强有力的AOX(醇氧化酶基因)启动子，用甲醇可严格地调控外源基因的表达
2.产物易分离，毕赤酵母所用发酵培养基十分廉价，一般碳源为甘油或葡萄糖及甲醇，其余为无机盐，培养基中不含蛋白，有利于下游产品分离纯化
3.外源蛋白基因遗传稳定，外源基因能以高拷贝数整合到毕赤酵母基因组中，不易丢失并能够得到高表达菌株
4.作为真核表达系统，毕赤酵母具有真核生物的亚细胞结构，具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻译后修饰加工功能
表达菌株特点：
GS115：AOX1和AOX2基因都正常表达AOX蛋白(乙醇氧化酶)，甲醇的利用效率高，接近于野生型，属于甲醇快速利用型(Mut+)
KM71：AOX1基因被大部分剔除，只能利用AOX2为AOX编码，甲醇利用速率变慢，表现为甲醇慢利用型(Muts)
外源基因的整合方式不同会导致表达菌株的表型不同：
Table 1. 酵母菌株表型
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限制酶 |
插入位点 |
GS115 表型 |
KM71 表型 |
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Sa1 I/StuI |
HIS4 |
HIS+Mut+ |
HIS+Muts |
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SacI |
5’AOX1 |
HIS+Mut+ |
HIS+Muts |
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Bg1 II |
取代AOX1 |
HIS+Muts |
HIS+Muts |
Table 2. 表达载体信息
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表达类型 |
载体名称 |
筛选标记 |
启动子 |
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胞内表达 |
pAO815 |
HIS4 |
AOX1 |
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pPIC3K |
HIS4 |
AOX1 |
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pPIC3.5K |
HIS4 |
AOX1 |
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分泌表达 |
pPICZα,A,B,C |
bler |
AOX1 |
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pPIC9K |
HIS4 |
AOX1 |
对于胞外表达的蛋白除了可以用载体自带的信号肽，还有以下信号肽可供选择：
Table 3 . 信号肽序列
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信号肽 |
蛋白序列 |
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AlphaMF* |
MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLEGDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEA |
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Dse4 |
MSFSSNVPQLFLLLVLLTNIVSG |
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Exg1 |
MNLYLITLLFASLCSA |
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Scw11 |
MLSTILNIFILLLFIQASLQ |
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SAlb |
MKWVTFISLLFLFSSAYS |
1.具有完备的毕赤酵母表达平台，可以根据蛋白特性或客户需求设计不同的实验方案
2.具有高通量筛选平台，可以快速有效地获得 表达条件
3.具有大规模发酵生产的能力
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服务内容 |
客户提供 |
服务步骤 |
服务周期 |
交付内容 |
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毕赤酵母表达蛋白 |
基因序列 |
基因合成，密码子优化 |
2-4周 |
蛋白样品 技术服务报告 |
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亚克隆 |
1周 |
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蛋白表达测试，高通量筛选 |
2-3周 |
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发酵纯化 |
1-2周 |
案例1：
蛋白A全长基因合成后亚克隆至表达载体pPICZαA，转化毕赤酵母菌株X33，蛋白分泌表达成功(28kDa;C端6*His)，产量7mg/L，纯度大于90%，质检图如下：
蛋白A 纯化质检图（Reduced SDS-PAGE）
案例2：
蛋白B基因合成后亚克隆至表达载体pPIC3.5K分别转化毕赤酵母菌株GS115/KM71进行胞内表达，SDS-PAGE检测结果显示蛋白B(糖基化后40kDa)有明显表达，其中克隆GS115-5#(24h，0.5%甲醇)，GS115-2#(48h，1%甲醇)，GS115-3#(48h，1%甲醇)都能成功表达目的蛋白。
蛋白 B 表达测试图（Reduced SDS-PAGE）
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