在免疫学研究中，抗原特异性T细胞是理解抗病毒应答与疫苗效果的关键。然而，这些细胞往往频率极低，且在不同病原体驱动下呈现截然不同的分化特征。OMIP-002将pMHC-I multimer技术与多色流式表型分析相结合，不仅能在一次实验中同时捕捉多种抗原特异性CD8+T细胞，还能将这些稀有群体映射到分化轨迹之中，从而揭示不同病毒特异性免疫应答的独特模式。
一、方案指标
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靶标 |
荧光素 |
作用 |
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CD3 |
APC-Cy7 |
T细胞谱系标记 |
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CD4 |
QD705 |
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CD8 |
PE- Ax594 |
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CD14 |
Pacific blue |
排除死细胞、B细胞、单核细胞、巨噬细胞 |
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CD19 |
Pacific blue |
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Dead cells |
VIVID |
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CD27 |
PE-Cy5 |
记忆细胞、分化标志物 |
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CD127 |
PE-Alexa700 |
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CCR7 |
PE-Alexa750 |
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CD45RO |
APC-Alexa700 |
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CD57 |
FITC |
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PD-1 |
Biotin-APC |
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Multimer 1 |
PE |
不同pMHC-1多肽聚合体 |
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Multimer 2 |
QD565 |
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Multimer 3 |
QD605 |
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Multimer 4 |
QD800 |
二、圈门逻辑
三、实验结果展示
1. 去黏连（FSC-H/A），排除死细胞、B细胞、单核细胞（CD3+CD14-CD19-VIVID-），去除染料的黏连（CD45RO/PD-1）。
2. 在CD3+细胞中通过CD8与Multimer确定哪些细胞识别pMHC-1多肽聚合体。
3. 在CD8+中确定不同细胞表型。
4. 把B图中的multimer+事件投影到C图中，展示不同pMHC-1多肽聚合体在不同表型细胞中的表达情况。
四、方案解读
1. 多抗原特异性细胞并行检测
一次实验用4个pMHC-I multimer同时捕捉CMV和EBV的不同表位特异性CD8+T细胞。解决了低频群体检测的低通量问题，大幅提高实验效率。
2. 抗原特异性群体的表型直接映射
将multimer+胞投射到CCR7/CD45RO/CD27等分化坐标上，直观显示不同病毒特异性群体的分化偏好。第一次把低频特异性T细胞的识别和分化表型解读完整整合到一个panel里。
3. 标准化、可复现的面板设计
panel中的marker排布与荧光选择经过优化，使低频multimer信号和分化表型都能被清晰分辨。为当时的多色流式提供了可直接复现的实验模板。
五、小结
OMIP-002展示了一种精准捕捉稀有抗原特异性T细胞，并直接解析其分化状态的流式策略。它不仅回答“有多少”，还能揭示“是什么状态”，成为研究病毒应答、疫苗免疫和免疫衰老的经典方案。
参考文献
[1] Chattopadhyay, P.K., Roederer, M. and Price, D.A. (2010), OMIP-002: Phenotypic analysis of specific human CD8+ T-cells using peptide-MHC class I multimers for any of four epitopes?. Cytometry, 77A: 821-822.
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