OMIP-015方案聚焦细胞表面标志物，无需细胞内染色即可分析调节性T细胞（Treg）和激活性T 细胞，简化实验操作并避免固定、透化等步骤的复杂性，为活细胞分选及功能基因组学分析提供可能。
Treg 细胞在不同病理生理状态中可表现出免疫抑制功能的增强或减弱，甚至向促炎表型转化。这种功能可塑性受复杂调控网络影响，其分子机制尚未完全阐明，给精准靶向调控 Treg 功能带来了巨大困难。
通过CD25/CD127 等表面标志物组合定义Treg，省去细胞内染色步骤，简化流程并保留细胞活性，支持活细胞分选及多维度功能研究。
OMIP-015方案由Mahnke等人开发，旨在不使用细胞内染色的情况下，对调节性T 细胞（Treg）和激活性T 细胞进行分析。与传统依赖细胞内染色（如FoxP3 标记）的方法不同，这一方案聚焦于细胞表面标志物，简化了实验操作，同时避免了固定、透化等步骤的复杂性。该方案不仅在细胞功能学研究中具有重要价值，还为活细胞分选、功能性和基因组学分析提供了可能。
| 靶标 | 荧光素标记 | 检测作用 |
| Dead Cells | AqBlu | 去除死细胞 |
| CD3 | BV785 | T 细胞标志物 |
| CD4 | QD605 | |
| CD8 | QD585 | |
| CD25 | PE-Cy5 | Treg细胞标志物 |
| CD127 | APC-eF780 | |
| CD39 | PE-Cy7 | Treg功能标志物 |
| CD73 | PE | |
| CD38 | PE-CF594 | 活化/分化标志物 |
| CD45RA | QD705 | T细胞分化/激活标志物 |
| CD45RO | FITC | |
| HLA-DR | Alexa 680 | |
| PD-1 | BV421 |
图1. OMIP-015圈门策略总览
PBMC去黏连，圈出主细胞群，通过死活染色筛选活细胞，再圈定CD3+T细胞群体。
通过CD4/CD8染色区分CD4+T 细胞和CD8+T 细胞亚群，去除染料粘连干扰。
在CD4+T 细胞中通过CD25/CD127 表型（CD25hiCD127-）界定Treg 细胞群体。
通过CD39/CD73评估功能状态，CD45RA/CD45RO分析分化阶段，CD38/HLA-DR及PD-1评估激活状态。
1、 PBMC去黏连，圈出活的CD3+T 细胞，然后去除染料粘连，再圈出主细胞群，通过CD4/CD8分别圈出CD4+T 细胞和CD8+T 细胞。
2、 分别在CD4+T 细胞和CD8+T 细胞中通过CD39/CD73，CD45RA/CD45RO， CD38/HLA-DR 和CD45RA/PD-1 研究细胞的分化/活化等能力。CD25/CD127 确定Treg 细胞（CD25hiCD127-）。
3、 对Treg 细胞进一步分析，通过CD39/CD73，CD45RA/CD45RO，CD38/HLA-DR和CD45RA/PD-1 研究Treg 的成熟状态，调节潜力和细胞活化状态。D图显示了表达所测量的激活标志物的任意组合占总Treg 细胞的比例。
传统的Treg 标记方法依赖于FoxP3 等细胞内标记，这需要额外的固定和透化步骤，而OMIP-015 通过结合CD25 和CD127 等表面标志物，成功避免了这一复杂过程。通过这种方式，OMIP-015 不仅简化了实验流程，还使得该方案能够更好地适应活细胞分选的需求，这对于后续的功能学和基因组学研究至关重要。
OMIP-015 方案的独特之处在于对Treg 细胞功能标记的精细选择。CD39 和CD73 被用作功能性标志物，这些分子在Treg 的免疫抑制功能中发挥重要作用。研究表明，CD39 与CD73 共同作用，通过生成腺苷，抑制免疫反应，尤其在肿瘤微环境中具有重要的免疫调节作用。此外，CD45RA 和CD45RO 的组合帮助区分不同的Treg亚群，进一步揭示了它们的成熟状态和激活潜力。
除了Treg的表型分析，OMIP-015还对CD4+和CD8+T 细胞的激活状态进行了全面评估。通过结合CD38、HLA-DR 和PD-1等激活标志物，方案能够详细描绘T 细胞的激活过程，尤其是在慢性疾病如HIV 感染中的作用。这些标志物的表达在T细胞活化过程中有着重要的指示意义，能够帮助研究人员了解T 细胞在免疫反应中的角色。
（调节性T 细胞（Treg）表型分析） （T 细胞激活与分化） （HIV 和其他慢性感染中的免疫监测） （活细胞分选与功能/基因组分析） （临床免疫监测队列研究） （疫苗免疫反应评估）
总的来说，OMIP-015 在免疫学研究中具有广泛应用，尤其在研究Treg生物学、T细胞激活以及免疫调节方面，能够在健康与疾病状态下提供重要的免疫学数据。
OMIP-015方案通过表面标志物的选择和精细的功能标记，对细胞进行快速而精准的表型分析，克服了传统染色方法的局限性。其在免疫学、肿瘤学和病毒学研究中的应用前景广阔，尤其适用于探索Treg细胞在免疫逃逸、免疫耐受及激活中的多重作用。通过减少实验操作的复杂性和提高数据的准确性，OMIP-015为T 细胞的表型与功能研究提供了一个强有力的工具。
[1] Mahnke YD, Beddall MH, Roederer M. OMIP-015: human regulatory and activated T-cells without intracellular staining. Cytometry A. 2013 Feb;83(2):179-81.
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