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抗体太烧脑一篇一拆解 第7期|二抗选不好,实验容易翻车?不同免疫实验的二抗选择全解析!

发表时间:2025-07-29

引言

抗体实验中,大家往往更关注一抗的选择,而忽视了二抗的正确搭配。但其实,二抗是否选对,直接影响信号强弱与背景水平。今天我们就来系统梳理不同免疫学实验中常见的二抗选择原则,并特别解析IP-WB中“二抗乱象”背后的关键逻辑。abinscience提供高品质二抗产品,支持您的实验需求。


Fig.1.抗体实验中一抗与二抗的搭配示意图


常见实验的二抗选择策略

Fig.2.二抗选择解析


什么是交叉吸附二抗?

交叉吸附(Cross-adsorbed)是指二抗经过特殊处理,去除了会与非目标物种IgG发生非特异性结合的部分。

Fig.3.交叉吸附(Cross-Adsorption or Pre-Adsorption)二抗工作原理图

这样可以显著降低背景、提高特异性,尤其适合组织样本、流式、多标染色等对信噪比要求较高的实验。abinscience提供经过优化处理的交叉吸附二抗。


IP-WB 中的二抗如何选?

免疫沉淀(IP)后接WB检测的组合,最容易踩坑的一项,就是二抗“识别了IP用的一抗”,导致假阳性或重影带。以下是不同组合推荐用法整理(建议收藏):

Fig.4.IP-WB中二抗选择与假阳性对比图

总结建议

  • ? 一抗与二抗种属匹配,是基本原则
  • ? 同种属操作(如兔抗+兔样本),优先使用交叉吸附二抗
  • ? IP-WB组合需关注“是否识别到IP步骤中的一抗”
  • ? 多重染色、流式实验中建议选用去Fc段结构(F(ab')?)与交叉吸附型二抗

下一期内容预告

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参考文献

  • Sharma S, et al. Guidelines for antibody use in physiology research. Am J Physiol. 2017.

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