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OMIP-005:11色分析抗原反应性T细胞的定性和表型

发表时间:2025-11-19

OMIP-005通过11色方案对抗原反应性T细胞进行细致的定性和表型分析。该方案的设计不仅提高了对T细胞细胞因子水平的检测精度,还提供了一种更高效的方式来区分和分析记忆性T细胞亚群的功能特性。通过精心设计的标志物组合,OMIP-005能够同时监测T细胞活化、记忆性T细胞亚群的表型,以及细胞因子的分泌。这使得研究人员能够更全面地了解免疫反应的复杂性,尤其是在细胞因子与T细胞亚群功能的关联方面,提供了新的研究视角。

 

一、方案指标

靶标

荧光素

作用

Dead cells

Aqua Blue

排除死细胞

CD3

Pacific Blue

T细胞检测

CD4

APC-Cy7

CD8

Aqua

CD69

FITC

排除未活化的细胞,减少背景干扰

IFN-γ

PE

细胞因子检测

IL-2

PE-Alexa610

TNF

PE-Cy5

CD45RA

PerCP-Cy5.5

记忆细胞分型

CD28

PE-Cy7

CCR7

Qdot605

 

二、圈门逻辑

OMIP-005:11色分析抗原反应性T细胞的定性和表型

 

三、实验结果展示

1. PBMC中去黏连,排除死细胞,圈出CD3+T细胞,再区分CD4+和CD8+T细胞。

OMIP-005:11色分析抗原反应性T细胞的定性和表型

 

2.分别在CD4+和CD8+T细胞中通过圈出能分泌细胞因子的细胞(CD69排除未活化细胞的背景干扰)。

OMIP-005:11色分析抗原反应性T细胞的定性和表型

 

3.通过CD45RA、CD28、CCR7区分CD4+和CD8+T细胞(灰色)的不同表型,将图B中能分泌细胞因子的细胞(蓝色)投影到图C中,观察不同类型的细胞分泌细胞因子的能力。

OMIP-005:11色分析抗原反应性T细胞的定性和表型

 

四、方案解读

1. 创新的分层设计与高效的扩展能力

通过8色流式细胞术检测T细胞中的细胞因子水平,在8色基础上扩展3个标志物(CD45RA,CD28,CCR7),可进一步区分记忆性T细胞亚群(如中央记忆T细胞TCM、效应记忆T细胞TEM),并精准测量各亚群的细胞因子分泌特征。

2. 背景控制策略:CD69活化标记的精准排除

OMIP-005引入CD69作为活化T细胞的特异性标志物,通过“排除未活化细胞”的策略,有效地排除未活化的T细胞,从而减少背景噪声。

3. 标志性的实验设计,奠定后续OMIP方案的基础

作为OMIP系列的“细胞因子+亚群”双维度检测方案,其设计逻辑(如多参数组合优化、背景控制策略)为后续OMIP-052OMIP-075等方案提供了方法论模板。

 

五、小结

OMIP-005的实验方案展示了创新的多参数流式细胞术设计,成功将细胞因子的检测与记忆性T细胞亚群的分析相结合,为免疫学研究提供了强大的技术支持。此外,这一方案的成功实施也为后续OMIP系列方案的设计和优化奠定了基础,为相关领域的研究者提供了一个宝贵的实验模板。

 

参考文献

[1] Foulds KE, Donaldson M, Roederer M. OMIP-005: Quality and phenotype of antigen-responsive rhesus macaque T cells. Cytometry A. 2012;81(5):360-361.

 

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