OMIP-005通过11色方案对抗原反应性T细胞进行细致的定性和表型分析。该方案的设计不仅提高了对T细胞细胞因子水平的检测精度,还提供了一种更高效的方式来区分和分析记忆性T细胞亚群的功能特性。通过精心设计的标志物组合,OMIP-005能够同时监测T细胞活化、记忆性T细胞亚群的表型,以及细胞因子的分泌。这使得研究人员能够更全面地了解免疫反应的复杂性,尤其是在细胞因子与T细胞亚群功能的关联方面,提供了新的研究视角。
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靶标 |
荧光素 |
作用 |
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Dead cells |
Aqua Blue |
排除死细胞 |
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CD3 |
Pacific Blue |
T细胞检测 |
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CD4 |
APC-Cy7 |
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CD8 |
Aqua |
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CD69 |
FITC |
排除未活化的细胞,减少背景干扰 |
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IFN-γ |
PE |
细胞因子检测 |
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IL-2 |
PE-Alexa610 |
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TNF |
PE-Cy5 |
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CD45RA |
PerCP-Cy5.5 |
记忆细胞分型 |
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CD28 |
PE-Cy7 |
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CCR7 |
Qdot605 |
1. PBMC中去黏连,排除死细胞,圈出CD3+T细胞,再区分CD4+和CD8+T细胞。
2.分别在CD4+和CD8+T细胞中通过圈出能分泌细胞因子的细胞(CD69排除未活化细胞的背景干扰)。
3.通过CD45RA、CD28、CCR7区分CD4+和CD8+T细胞(灰色)的不同表型,将图B中能分泌细胞因子的细胞(蓝色)投影到图C中,观察不同类型的细胞分泌细胞因子的能力。
1. 创新的分层设计与高效的扩展能力
通过8色流式细胞术检测T细胞中的细胞因子水平,在8色基础上扩展3个标志物(CD45RA,CD28,CCR7),可进一步区分记忆性T细胞亚群(如中央记忆T细胞TCM、效应记忆T细胞TEM),并精准测量各亚群的细胞因子分泌特征。
2. 背景控制策略:CD69活化标记的“精准排除”
OMIP-005引入CD69作为活化T细胞的特异性标志物,通过“排除未活化细胞”的策略,有效地排除未活化的T细胞,从而减少背景噪声。
3. 标志性的实验设计,奠定后续OMIP方案的基础
作为OMIP系列的“细胞因子+亚群”双维度检测方案,其设计逻辑(如多参数组合优化、背景控制策略)为后续OMIP-052、OMIP-075等方案提供了方法论模板。
OMIP-005的实验方案展示了创新的多参数流式细胞术设计,成功将细胞因子的检测与记忆性T细胞亚群的分析相结合,为免疫学研究提供了强大的技术支持。此外,这一方案的成功实施也为后续OMIP系列方案的设计和优化奠定了基础,为相关领域的研究者提供了一个宝贵的实验模板。
[1] Foulds KE, Donaldson M, Roederer M. OMIP-005: Quality and phenotype of antigen-responsive rhesus macaque T cells. Cytometry A. 2012;81(5):360-361.
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