婴幼儿及临床试验的外周血样本往往血量有限(≤5 mL),如何在细胞数量极度受限的前提下,最大限度获取免疫系统组成信息,是流式分析长期面临的现实难题。传统多管染色策略不仅消耗大量细胞,也难以在同一实验框架下实现不同细胞谱系间的关联分析。
OMIP-024通过单管18色panel,系统涵盖了T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞、树突状细胞等九大类主要免疫细胞亚群,并在同一体系中同步完成记忆分化、激活状态、功能成熟度等多维表型评估。这种设计将原本需要多管联合才能完成的免疫图谱压缩至单管,极大提升了珍贵样本的信息产出效率。
OMIP-024的诞生源于非洲婴幼儿疟疾疫苗临床试验的实际需求。围绕“解析疫苗免疫应答人群差异”这一核心问题,方案在标志物选择上坚持生物学意义优先原则,针对目标人群特征优化了γδ T细胞与NK细胞的检测体系,并提前完成HIV合并感染等复杂背景下的性能验证,使方案真正适配真实世界的临床样本检测场景。
白细胞亚群的系统性解析是理解疫苗免疫应答、感染免疫机制及疾病进程的基础。OMIP-024作为一个专为微量临床样本开发的18色免疫表型分析方案,在单管中实现了从主要淋巴细胞到稀有髓系细胞的全面覆盖,并同步评估其分化、激活与功能状态,为婴幼儿及临床试验微量样本研究提供了一个高效、可靠的全景分析工具。
| 靶标 | 荧光素 | 作用 | abinScience推荐 |
| Live/Dead | AViD | 排除死细胞 | — |
| CD3 | ECD |
Lineage T cells |
查看CD3抗体 |
| CD4 | BUV395 | 查看CD4抗体 | |
| CD8 | PerCP-Cy5.5 | 查看CD8抗体 | |
| CD19 | BUV737 | B cells | 查看CD19抗体 |
| CD14 | BV711 | Monocytes | 查看CD14抗体 |
| CD56 | BV605 | NK cells and NK T-like cells | 查看CD56抗体 |
| CD16 | APC-Cy7 | NK cells and monocytes | 查看CD16抗体 |
| CD25 | BV421 | Tregs | 查看CD25抗体 |
| CD127 | APC | Tregs/memory/differentiation | 查看CD127抗体 |
| γδ TCR | PE-Cy7 | γδ T cells | 查看γδ TCR抗体 |
| Vδ2 | PE | 查看Vδ抗体 | |
| CD45RA | BV650 | Memory/differentiation | — |
| CCR7 | BV785 | 查看CCR7抗体 | |
| CD57 | FITC | — | |
| HLA-DR | BV570 | Activation | 查看HLA-DR抗体 |
| CD38 | PE-Cy5 | Activation/plasmablasts | 查看CD38抗体 |
| NKG2C | Alexa700 | NK receptor | — |
图1. OMIP-024圈门策略总览
排除黏连体,液流不稳定信号及死细胞。
单核细胞,γδ T细胞,CD4+ T细胞,CD8+ T细胞,Treg细胞,NKT细胞,NK细胞,B细胞群的确认及分析。
通过CD45RA/CCR7/CD57/CD127/CD38/HLA-DR分析不同T细胞表型。
分析NKT和NK亚群CD57和NKG2C表达情况。
1. 通过Time门排除液流不稳定的信号,然后排除死细胞、B细胞、单核细胞,排除染料黏连,圈出活的CD3+T细胞,再圈出CD4+和CD8+T细胞
2. 在活细胞群中通过FSC-A/SSC-A圈出主细胞群,在主细胞群中通过CD3/CD56圈出CD3+CD56+ NKT细胞。主细胞群可以分成:CD3+ T细胞和CD3- T细胞。
在CD3+ T细胞中,通过γδ TCR和Vδ2区分出γδ T细胞;也可以通过CD4/CD8圈出CD4+ T细胞和CD8+ T细胞,然后在CD4+ T细胞中通过CD25/CD127圈出Treg细胞。
在CD3- T细胞中,通过CD16和CD56圈出不同类型的的NK细胞;通过CD19圈出CD19+ B细胞,在B细胞中通过CD38圈出浆细胞。
3. 排除CD3+CD14+CD19+CD16+细胞后,圈出HLA-DR+的树突状细胞。
4. 通过CD45RA/CCR7/CD57/CD127/CD38/HLA-DR分别分析CD4+和CD8+ T细胞的活化、分化、记忆状态。
5. 分析NKT和NK亚群CD57和NKG2C表达情况。
1. 单管实现“谱系-分化-激活-功能”四维信息全覆盖
OMIP-024并非简单将不同细胞谱系的标志物整合到一管,而是通过标志物的功能复用,在单管染色体系中,既实现了9大类核心免疫细胞的精准分群(涵盖CD4+/CD8+T细胞、调节性T细胞(Treg)、γδ T细胞、NK细胞功能亚群、单核细胞功能亚群、B细胞、浆母细胞及树突状细胞),又同步完成了T细胞记忆分化、细胞衰老、免疫激活状态、NK细胞功能成熟度等多维度表型的全景解析,真正在单管中实现了“细胞谱系-分化轨迹-激活状态-功能潜能”四维免疫信息的全覆盖。这种设计让原本需要5-8管染色才能获得的免疫全景数据,在单管中即可完成,细胞损耗降低80%以上,完美适配婴幼儿微量样本、临床试验珍贵样本的检测需求。
2. “科学问题导向”的方案设计,实现方法学与生物学研究的深度绑定
OMIP-024所有实验设计都围绕“解析疫苗免疫应答的人群差异”这一核心科学问题展开,每一个标志物的取舍、每一步实验的优化,都有明确的生物学意义,方案以疫苗与感染相关的功能亚群为核心,用兼具T细胞分化与NK细胞功能表征价值的CD57替换功能单一的 CD28,以“一标多用”的设计从根源上杜绝无意义的参数堆砌;同时针对目标研究人群,重点优化疟疾免疫核心的γδ T、NK细胞检测体系,提前完成HIV合并感染人群的检测性能验证,让方案脱离纯方法学的理论设计,真正实现了技术方法与临床科研需求的深度适配。
(疫苗免疫原性评价)(感染免疫全景分析)(免疫细胞发育与分化研究)(免疫衰老与功能耗竭评估)(自身免疫病免疫谱系分析)(肿瘤免疫微环境细胞组成解析)(临床试验珍贵样本多维度检测)
OMIP-024并非一个单纯追求参数数量的panel,而是一个真正从真实科研需求中生长出来的解决方案。面对婴幼儿及临床试验微量样本的现实限制,通过精密的标志物组合与功能复用设计,在单管中将细胞谱系鉴定、记忆分化轨迹、激活状态评估与功能潜能解析融为一体,实现了从“尽可能多检测几个指标”到“系统回答免疫全景问题”的跨越。OMIP-024在疫苗评价、感染免疫及儿童疾病研究中具有广泛的应用前景。
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[1] Moncunill G, Han H, Doba?o C, McElrath MJ, De Rosa SC. OMIP-024: pan-leukocyte immunophenotypic characterization of PBMC subsets in human samples. Cytometry A. 2014 Dec;85(12):995-8.
abinScience创立于法国,专注于高质量生命科学试剂的开发与生产,立足法国斯特拉斯堡创新科技中心,以"Empowering Bioscience Discovery"为愿景。abinScience流式抗体产品覆盖常用检测指标,品类丰富,可满足多物种(Human/Mouse/Rat/Dog/Hamster/Monkey等)科研实验需求,为科研提供稳定可靠的支持。
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