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OMIP-027:人自然杀伤(NK)细胞功能分析多色流式检测方案

发表时间:2026-05-15

NK细胞功能研究的关键问题

作为先天免疫系统的重要效应细胞,NK细胞在抗病毒感染、肿瘤免疫及疫苗应答中发挥重要作用。其功能依赖于快速响应,包括抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)和细胞因子释放等多种机制。然而,NK细胞功能具有明显的异质性,不同刺激条件下,其功能输出模式存在明显差异,这也使其在流式细胞术中的系统性评估具有一定难度。

多维功能与分化状态的耦合关系

NK细胞的功能并不是孤立存在的,细胞的分化阶段、活化状态以及转录调控水平,都会直接影响其功能输出。例如,不同成熟度的NK细胞在细胞毒能力和细胞因子分泌上存在明显差异,而特定转录因子又参与调控这些功能路径。因此,仅从单一维度(如表型或单一功能指标)进行分析,往往难以完整描述NK细胞的真实状态,这也对流式实验的设计提出了更高要求。

面向多维功能解析的NK细胞分析方案

OMIP-027在NK细胞表型分析基础上,引入多类功能指标及不同刺激体系,在单一实验框架中同时评估NK细胞的功能输出、分化状态及调控特征。该方案不仅能够区分不同功能路径下的NK细胞,还可用于比较不同疾病状态或免疫背景下NK细胞的功能差异,为感染免疫研究及疫苗评估提供了系统、具有可比性的分析工具。

OMIP-027在传统NK细胞分析框架基础上,进一步整合了功能检测与分化状态评估,在单次实验中实现对NK细胞“分化—调控—功能”的系统性解析。该方案为研究NK细胞在感染、肿瘤及疫苗应答中的功能变化提供了更加直接和完整的技术路径,也为复杂免疫环境下的功能评估提供了可参考的方法。

 一、方案指标

Target Fluorochrome Function abinScience Recommendation
Live Dead Aqua Viability
CD3 APC-Cy7 T细胞标记 查看CD3抗体
CD4 APC-H7 辅助T细胞标记 查看CD4抗体
CD14 PE-Cy5 单核细胞标记 查看CD14抗体
CD19 PE-Cy5 B细胞标记 查看CD19抗体
CD16 Pacific Blue NK细胞标记 查看CD16抗体
CD56 PE-Cy7 查看CD56抗体
CD107a FITC NK细胞脱颗粒功能鉴定 查看CD107a抗体
IFN-γ BV711 细胞因子释放功能鉴定 查看IFN-γ抗体
TNF-α BV650 查看TNF-α抗体
Perforin PE 脱颗粒功能鉴定 查看Perforin抗体
Granzyme B PE CF594 查看Granzyme B抗体
CD8 BV785 细胞毒性T细胞标记 查看CD8抗体
Eomes PerCP eFluor 710 NK细胞成熟的转录因子
CD57 APC NK细胞终末分化的标记 查看CD57抗体

 二、圈门逻辑

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图1. OMIP-027圈门策略总览

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去除非目标细胞群体
PBMC先圈出淋巴细胞群,然后通过FSC-H/FSC-A去黏连,通过死活染料、CD3、CD4、CD14、CD19排除死细胞,T细胞,单核细胞和B细胞。
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去除非目标细胞群体
通过CD56和CD16标记筛选NK细胞群体,再分析CD107a、IFN-γ、TNF-α、Granzyme B、Perforin、Eomes、CD57、CD8等标志物的表达量。

 三、实验结果展示

1. 在PBMC中先圈出淋巴细胞群(其中部分SSC增大的也圈,因为细胞内颗粒度有时候可能会增多),FSC-A/H去黏连,再通过死活染料、CD3、CD4、CD14、CD19排除死细胞,T细胞,单核细胞和B细胞,圈出CD3-CD4-CD14-CD19-细胞。
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2. 在CD3-CD4-CD14-CD19-细胞中通过CD56和CD16筛选出NK细胞群体,再分析CD107a、IFN-γ、TNF-α、Granzyme B、Perforin、Eomes、CD57、CD8等标志物的表达量,最后对比不同刺激条件下NK细胞的功能反应,分别是未刺激、K562共培养、ADCC刺激、IL-12/IL-18刺激。

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 四、方案解读

1.构建“调控-分化-功能”三位一体的NK细胞分析框架

OMIP-027整合分化标志物CD57、转录调控因子Eomes与功能标志物(CD107a、IFN-γ、TNF-α、穿孔素、颗粒酶B),从而可以在单细胞水平上回答三个层次的问题:这个NK细胞处于什么样的分化状态?它是否具备执行杀伤功能的能力?它的功能受什么转录因子调控?这种“三位一体”的分析框架,突破了传统单一维度解析NK细胞的局限性,为研究NK细胞在慢性感染(如HIV)、肿瘤微环境中的功能耗竭与成熟状态,提供了一体化的技术支撑。

 

2. CD16动态变化揭示功能NK细胞亚群

经多刺激体系系统验证,发现不同刺激条件下CD56dimNK细胞活化后均会出现显著的CD16表达下调,且真正具备功能响应(脱颗粒、细胞因子分泌)的NK细胞,几乎全部集中于CD56dimCD16neg亚群。这一发现提醒研究者:如果仅以CD16阳性判断NK细胞功能,可能会遗漏主要的功能性细胞群体。因此,在功能分析中必须结合活化状态重新定义亚群。

新闻图片4图2. 不同刺激条件下CD56dimNK细胞活化后CD16表达下调

 

3. 设计多刺激体系对比:覆盖全场景功能评估

OMIP-027同步构建4种覆盖全研究场景的标准化刺激体系,精准模拟体内NK细胞的核心活化途径:

① K562细胞介导的天然细胞毒途径
② gp120包被靶细胞+HIVIG介导的ADCC途径
③ IL-12/IL-18介导的细胞因子活化途径
④ MVA痘苗病毒载体介导的疫苗相关活化途径

该设计完整覆盖基础机制研究、疾病病理研究、疫苗研发全场景的检测需求,实现不同活化途径下NK细胞功能响应的直接对比。

 五、适用研究方向

感染免疫研究)(肿瘤免疫研究)(疫苗免疫评估)(基础免疫机制研究)(免疫治疗研究)(免疫功能监测与人群差异研究

 六、小结

OMIP-027以NK细胞功能为核心,在单一实验体系中整合了分化状态、调控特征与功能读出,实现了对NK细胞多维状态的系统性解析。相比传统以表型分群或单一功能指标为主的分析方式,该方案能够更全面地反映NK细胞在不同刺激与免疫背景下的真实功能表现。对于感染免疫、肿瘤研究及疫苗评估等应用场景,OMIP-027提供了一种更具解释力和可比性的分析路径,也为复杂免疫环境中NK细胞功能研究提供了可靠的技术参考

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参考文献

[1] Costanzo MC, Creegan M, Lal KG, Eller MA. OMIP-027: Functional analysis of human natural killer cells. Cytometry A. 2015 Sep;87(9):803-5. doi: 10.1002/cyto.a.22719. Epub 2015 Jul 17. PMID: 26189970.

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