在传统的少色流式分群中，研究者通常依赖IgD、CD27、CD38、CD24等少数指标来划分B细胞亚群。然而，这种方法存在明显局限：一方面关键标志物有限，难以清晰区分主要亚群；另一方面无法在单一panel中整合多种共表达信息，容易遗漏新亚群。同时，多次平行染色不仅增加样本消耗，也不利于稀有样本的研究。
为此，OMIP-003构建了一个12色panel，整合锚定标志物（CD19、CD3、Aqua死细胞染料、IgD、CD24、CD27、CD38）与扩展标志物（CD21、CD95、CD45/B220、CXCR3、9G4抗体），在实现核心B细胞亚群标准化分群的同时，还能够揭示记忆B细胞的活化状态、自身反应性以及归巢潜力。
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靶标 |
荧光素 |
作用 |
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CD3 |
Pacific Blue |
排除T细胞 |
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CD19 |
APC-Cy7 |
B细胞主标志，用于初步筛选活B细胞 |
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Dead cells |
Aqua |
死活染料 |
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IgD |
FITC |
区分初始B细胞（IgD+）与记忆B细胞（IgD-） |
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CXCR3 |
PE |
趋化受体，反映B细胞向炎症组织迁移的能力 |
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CD24 |
PE-Alexa610 |
高表达提示初始或未成熟B细胞，低表达提示成熟/活化B细胞 |
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CD21 |
PE-Cy5 |
CR2，低表达（CD21^low）提示活化或潜在自身免疫相关B细胞 |
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CD38 |
PerCP-Cy5.5 |
在IgD-区域中标记Plasmablasts（CD27+CD38+） |
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CD45/B220 |
PE-Cy7 |
辅助区分成熟与未成熟/生发中心B细胞 |
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CD27 |
Qdot605 |
区分已转换记忆（CD27+）与CD27-记忆B细胞 |
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CD95 |
APC |
Fas受体，上调表示B细胞活化或易凋亡 |
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VH4-34 idiotype |
Biotin |
VH4-34编码的自身抗体B细胞标记，健康人主要在IgD+Na?ve区 |
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Biotin |
Alexa680 |
1. PBMC中圈出主细胞群，去黏连，圈出活细胞，通过CD3-CD19+圈出B细胞群。
2. B细胞群中通过IgD/CD27区分出不同分化阶段的B细胞，在IgD-细胞群中通过CD27+CD38+确定plasmablasts群，在IgD+细胞群中通过9G4确定自身反应性B细胞群。
3. 在IgD-细胞中用B220、CD24、CD21、CD95、CXCR3和CD27解析：活化状态、成熟程度、迁移潜力及记忆亚群差异，对比健康与SLE病人的不同。
4. 分别对比CD3-CD19+B细胞与CD-CD19+CXCR3+中的IgD-CD27-和IgD-CD27+ memory细胞群CD95/CD21表达的差异性。
1. 全面覆盖人类记忆B细胞亚群
OMIP-003的12色panel在一个实验中即可区分Na?ve B细胞（IgD+CD27-）、未转换记忆B细胞（IgD+CD27+）、以及已转换记忆B细胞（CD27+ SM与CD27- SM），并能进一步识别浆母细胞（CD27+CD38+）。这一设计克服了传统方案指标有限的不足，使主要B细胞亚群在同一panel中得到标准化分析。
2. 功能与迁移状态结合
CD21和CD95：用于判断B细胞是否处于活化状态。研究表明，在SLE患者中，CD27- SM细胞常表现为CD21下调、CD95上调，提示其处于异常活化状态。
CXCR3：用于评估B细胞向炎症组织的迁移潜能。在疾病背景下，CXCR3表达的上调提示这些B细胞可能更容易进入炎症微环境。
CD24和B220/CD45：辅助区分发育阶段和成熟度。
3. 展示了SLE与健康状态下，B细胞的不同
在健康个体中，B细胞亚群的分布相对稳定，自身反应性B细胞（9G4+）主要局限于 Na?ve区域，未进入记忆库。而在SLE患者中，CD27- SM B细胞显著扩增，并伴随活化和迁移相关表型的异常变化，说明这一群体可能在疾病发病中发挥关键作用。
OMIP-003为人类记忆B细胞的表型分析建立了标准化框架。它不仅能清晰划分传统与新型记忆亚群，还能结合活化、迁移及自身反应性等维度进行综合解读。该方案在自身免疫研究、感染免疫学、疫苗学及移植免疫学中均具有重要价值，是记忆B细胞研究的里程碑式工具。
[1] Wei C, Jung J, Sanz I. OMIP-003: phenotypic analysis of human memory B cells. Cytometry A. 2011 Nov;79(11):894-6. doi: 10.1002/cyto.a.21112. Epub 2011 Jul 27.
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